微生物样品制备中对培养基的温度要求(微生物实验室的温度和湿度有何要求？)
微生物实验室的温度和湿度有何要求？
一般温度为：18-26度，湿度：45%-65%。《GB 4789.1—2016 食品安全国家标准食品微生物学检验总则》该标准作为了食品微生物学检验基本原则和要求，对检测环境提出了一些要求，内容如下：
1、实验室环境不应影响检验结果的准确性；就食品微生物实验室而言，比较容易受到环境影响的操作有无菌检测，如果在洁净室内进行，那么洁净室容易受到外界环境污染，洁净室设计是否合理，如远离污染区、洁净室与外界环境是否有二级缓冲间隔离、试验人员进入洁净室是否更换洁净服，佩戴口罩，手套等等。
2、实验室区域应与办公区域明显分开；实验室办公室与试验区不得在同一区域，即办公室不得设置在实验室内部，这是实验室设计时需要特别注意的一个要求。
3、实验室工作面积和总体布局应能满足从事检验工作的需要，实验室布局宜采用单方向工作流程，避免交叉污染；食品微生物实验室应配备足够的功能区，如：准备室、洁净室、生化室（BSL-2实验室配置生物安全柜）、培养室、洗消室等，且房间的布局因用单向工作流程，洁净区与非洁净区分布兼具合理性、科学性、实用性，一个设计优秀的微生物实验室，是微生物检测准确性的有力保障。
4、实验室内环境的温度、湿度、洁净度及照度、噪音等应符合工作要求；该标准未准确提出相关的技术参数，以下是个人总结的一些技术文件对微生物实验室温度、湿度、照度、噪声和洁净度的技术要求，可参考作为实验室设计、日常环境监控时的判定值。
扩展资料
微生物实验室建设时应具备良好的自然通风，必要时应配备抽风机。接种、分离及鉴定细菌等操作应在生物安全柜中进行，对结核杆菌等传染性极强的微生物学检验时必须在100%外临床微生物学实验室接触多种有害微生物，为了防止交叉污染，保护工作人员健康，实验室应至少划分成3个区：
一、清洁区
包括：办公室、休息室、培养基配制室与试剂储藏室。此区域禁止带人细菌检验标本。
二、操作区
(1) 整洁：微生物操作区是各种病原菌相对集中的地方，为了减少粉尘流动，防止交叉污染，操作区应与外界分开。实验室工作人员进入操作区应换鞋，送标本人员不进入操作区，操作区地面用专用拖把每天拖1次，每周用消毒剂擦洗1次。每天早上工作前，用紫外线照射30min，或每天工作后，用紫外线照射60min，对整个操作区进行消毒；下午工作结束后用消毒液消毒工作台面，以保证工作环境的安全清洁。
(2) 光线：细菌培养的细小菌落及血清试验凝集颗粒的观察，都需要有充足的光线。操作区除设置常规照明灯外，还必须安装操作台灯，以保证实验结果的正确判断。
(3) 通风：由于各种病原菌集中，空气污浊，实验室要求保持排的生物安全柜中进行。
(4) 温度和湿度：由于无菌操作的要求，实验过程中经常使用酒精灯，因此，微生物实验室不能安装吊扇。为了达到实验所需的适宜温度，尤其：满足某些仪器对温度湿度的要求，实验室应安装空调。
(5) 电源：要求提供稳压、恒频的电源;根据仪器设备要求，必要时配备不间断电源。
(6) 水源：操作区内须设置水源。用于标本处理(如，细菌染色) 的水槽与工作人员洗手用的水槽不能混用。
(7) 污染物处理：操作区须备有消毒缸，以处理沾有活菌的玻片等污染物品。检验剩余的标本及使用过的带菌平板、试管均须集中地点安全放置，经消毒灭菌处理后再洗涤或丢弃。
二、无菌区
(1) 无菌室应完全封闭，进出无菌室至少要经两道门，中间隔有缓冲间，无菌室与外间设置一个可开闭的窗口，用于传递器具。
(2) 无菌室必须保持整洁。工作人员进入无菌室应换专用鞋、专用衣。无菌室使用前须用紫外线消毒30min，操作结束后清洁台面，再用紫外线消毒30min。定期用乳酸或甲醛熏蒸，彻底消毒。
(3) 无菌室仅用于培养基分装等无菌操作，不能进行有菌标本的操作。操作人员操作时应严格关门并戴好专用的口罩与帽子。
(4)无菌室内应有空气过滤装置，并安装空调。
参考资料来源：福州高新区政府—GB 4789.1—2016 食品安全国家标
参考资料来源：百度百科—微生物实验室
培养基的制备原则和要求是什么？
培养基是根据各类微生物生长繁殖的需要，用人工方法把多种物质混合而成的营养物。一般用来分离、培养菌类。常用的培养基有基础培养基、增菌培养基、选择培养基、鉴别培养基和厌氧培养基。在制备培养基时，应掌握如下原则和要求：
(一)培养基必须含有细菌生长繁殖所需要的营养物质。所用的化学药品必须纯净，称取的份量务必准确。
(二)培养基的酸碱度应符合细菌生长要求。按各种培养基要求准确测定调节pH值。多数细菌生长的适宜pH值为7.2～7.6，呈弱碱性。
微生物实验中培养基的配置应该注意什么？
1、常用玻璃仪器的准备
制备培养基所用的吸管、锥形瓶、毛细吸管、平皿等玻璃仪器用前要用肥皂水洗刷后用清水冲洗干净，晾干后备用。
（1）平皿用纸或布包好，或装在金属盒内，于121℃高压蒸汽菌3min后烘干，备用。
（2）试管管口用棉花塞或硅氟塑料试管塞塞好，再用布或报纸包扎好，121℃高压蒸汽灭菌20℃后烘干，备用。
（3）吸管及滴管先用少许棉花塞于吸口端（防止污染物吸出，或橡皮帽内的气体污染），然后用纸包后或装入金属吸管筒内，于121℃高压蒸汽灭菌20min后烘干，备用。其他玻璃器皿均应按上法处理，也应装金属筒内160℃干热灭菌2h后，备用。
2、培养基的制备及储存
（1）溶化：一般应放在玻璃器皿或搪瓷齐内。加入蒸馏水，隔水加热以促其溶解，加热时应经常搅拌，防止焦结，待其溶解后补足水分。
在使用干燥培养基时，先将蒸馏水按定量加入容器中，然后称取一定量培养基干粉放入水中，静置10—15min，搅拌，振荡，或延长时间以促进溶解，一般不要热，必要时加热，但时间不宜过长，温度不宜过高，避免某些营养成分被破坏。
（2）校正酸碱度（调节pH）：培养基必须有适当的pH。因此测定pH是培养基配制过程中的重要步骤之一，测定pH的标准温度为25士2℃。调节pH可用无菌的1mol/l氢氧化钠溶液或10%碳酸钠溶液、1mol/l盐酸溶液。当调节缓冲液的pH时，宜用6mol/l磷酸或10mol/l氢氧化钾溶液。灭菌后的pH会比灭菌前的pH升高或降低，一般高压灭菌前培养基的pH会比最终pH调高0.2左右，灭菌后基本合适。因此对培养基、缓冲液、试剂在灭菌前后的pH均进行测定，并记下每次pH的测定结果，有助于积累数据考察每种培养基、缓冲液、试剂对灭菌程序的耐受性，从而指导灭菌前pH的调节。干燥培养基一般已校正过pH，用时也必须再验证。测定时，一般用指示剂滴入培养基观察其颜色的变化，或用pH计校正，如与所需pH不符，可用以上的酸或碱液加以校正。调整pH后要加热过滤，使培养基澄清。
（3）培养基的分装：大批量配制时使用的自动分配器须经校准和确认。每次使用前后，均要对分配器的管道系统进行冲洗，在分装无菌培养基前，则要采用无菌硅胶管。
固体培养基一般分装在250ml、500ml锥形瓶中，高压灭菌后根据需要分装平皿或试管。
平皿：倾注平皿，应在无菌室中放置3—4h，如用塑料平皿须在35℃培养箱 中倒置30—60min。让水蒸汽自然蒸发。
斜面：制备低层斜面分装于试管，约占容积1/5，灭菌后趁热斜放在细玻璃棒和木杆上，使成斜度，分装使注意管口和瓶塞上勿沾有培养基，如沾有培养基应用布抹去，以避免污染。
高层斜面：制备高层斜面分装于试管，约占试管容积的1/3，灭菌后趁热放置成高层短斜面，待其凝固后应用。
分装好的培养基或缓冲液等及时密封后必须在配制当天（2h内最佳）进行灭菌处理。液体、半固体培养基一般在高压灭前分装，约装试管容积的1/3，在灭菌后还要加其他成分的液体、半固体培养基，灭菌后再分装于灭菌试管或锥形瓶中。
培养基的灭菌：培养基的灭菌多采用高压蒸汽灭菌，各种培养基的灭菌时间和压力，按其成分不同而定。普通培养基采用121℃、103.42kPa灭菌15min，但容器和装量较大时，应延长至20min。含糖培养基115℃、68.85kPa灭菌30min。含糖、血清、鸡蛋等培养基可用流动蒸汽及血清凝固器80—100℃、30min，连续3d，间歇灭菌。血清或组织液，采用低热56—58水浴1h，连续5—6d灭菌，一些遇高温即被破坏的物质如尿素、腹水等，可用细菌过滤器，过滤除菌。高压灭菌应严格按照操作规程执行，必须逐渐加热，彻底排除灭菌器内的空气，再逐渐升压保持预定的压力和时间，达到全部杀灭微生物。以上的灭菌时间和温度要经过验证确认，如不同类型培养基混合一起灭菌时宜采用115℃、68.85kPa灭菌30min为好。
微生物培养基的配制原则有哪些？（望详解）
培养基的制备和质量控制－培养基的制备
培养基是微生物测定的基础，培养基的质量因而成了保证微生物实验成功的关键。培养基的制备、合理的贮存、培养基的质量检验，能确保提供持续高质量的培养基。在按照可接受的来源和标准中的配方制备培养基的过程中，重要的是选择正确的培养基和成分。与脱水和制备好的培养基一起的还常常伴有供应商的配方和说明。因为不同的培养基可能有不同的制备要求（如：加热、填加物、
ph值的调节等），按照说明确保制备可接受的培养基是重要的。一份描述效期和建议贮存条件的COA是同制备好的培养基一起的，同时附有用于培养基的促生长试验和灵敏度测试的菌种。
水普遍用于微生物培养基的稀释。纯化水是最常用的，但是在有些情况下，也用去离子水和蒸馏水。稀释用水的体积应该记录。
使用脱水培养基和培养基组分来制备培养基时要准确称量。使用己校正的具有适合的称量范围的天平。使用清洁的容器和工具，防止配方中带入外来物质，改变培养基的最终组成。称量也应该记录。
脱水培养基先在水中分散，并完全溶解和灭菌。如果必要可以加热使溶解,但要防止过度加热，因为所有的培养基或多或少有对热敏感的。用于培养基制备的设备应适于加热控制，持续搅拌，溶质混合。培养基变黑（梅特拉反应和非酶的棕色着色剂）通常显示过度加热。当需要向培养基中添加补充物时，添加后应充分混合。
制备好的培养基应放在清洁无菌的玻璃器具中，也可以加入抑制性物质。抑制性物质可以由器具清洁时产生也可由先前贮存在此器具的物质产生。必须确保清洁过程能有效去除残留和异物，确保清洁剂用纯化水充分清洗。参见《1051玻璃器具的清洗》。
培养基的灭菌应根据供应商提供的参数或用户自己的验证。买来的制备好的培养基应提供其使用的灭菌方法的文件。理想的供应商应提供培养基的灭菌保证水平（SAL），此水平是依靠公认的生物指示剂确定的。湿热高压灭菌是首选的灭菌技术，除了一些为避免培养基中的热敏物质遭到破坏而采用的煮沸方法。通过过滤灭菌对有些配方也是合适的。
培养基的灭菌方法、灭菌条件的效果应通过培养基的灭菌和促生长试验来验证。另外，如果通过湿热灭菌，灭菌周期应经过验证，对选择合适的负载和体积来确保合适的热分布。通常供应商建议采用一个已校正过的灭菌高压锅，在121°灭菌15分钟。通常指培养基达到温度的时间。当灭菌锅负载结构影响加热的速度是时，越多的负载就需要越长的灭菌周期。然而，灭菌的时间取决于培养基的体积和高压锅的负载。灭菌周期中，当温度是慢慢上升时，可能导致培养基的过度加热。因此，必须仔细确认能达到最小的SAL要求的灭菌周期，在过度加热时，抑制培养基降解的趋势。在流体循环完成后，不主张放冷后的培养基中放在灭菌锅中贮存，因为这样可能破坏培养基。不合适的加热或灭菌（对买来的培养基或是内部制备的培养基）可能导致颜色的不同变化，不透明，改变培养基的规格，或是PH发生漂移（与供应商的提议范围）。
通过无菌技术为测试制备的每一批培养基其PH在放冷至室温（25°）后，都应测定。一个扁平的pH计用于培养基表面pH值的测定，浸入式的pH计用于液体的测定。各供应商提供的培养基的pH应该在规定的±0.2的范围内，除非通过验证得到更宽的范围。
制备培养基应对培养皿和试管进行适当如下的检查：
有裂纹的容器和盖子；
容器内不同的填充体积；
有裂纹容器内可导致脱水的结果或是固体培养基表面起皱；
溶血；
额外黑或颜色改变；
可能过冷引起的结晶；
过量的气泡；
微生物的污染；
氧化显示的情况；
批号、效期的检查和记录；
培养基的灭菌。