基因克隆的基本步骤 基因克隆完整操作步骤

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首先是目的DNA片段的获得,然后将目的片断和载体分子连接,将导入受体细胞,重组子的筛选,

克隆技术可以用来生产“克隆人”,可以用来“复制”人,因而引起了全世界的广泛关注.对人类来说,克隆技术是悲是喜,是祸是福?唯物辩证法认为,世界上的任何事.

克隆是指生物体通过体细胞进行的无性繁殖,以及由无性繁殖形成的基因型完全相同的后代个体组成的种群.通常是利用生物技术由无性生殖产生与原个体有完全相同基因.

利用LBA4404进行植物基因转导时,需要与合适的双元载体配合使用,如: pRI909,其含有T-DNA区,此区中的致瘤基因被删除,并插入了适当的选择标记和多克隆位点.实验时,将目的基因插入双元载体,.

真核生物复制特点是:多起点,双向复制.至于同时与否,需要看复制环的大小.同大则同时复制,不同大小则不同时.所以不一定是一起开始的,因为酶的数量有限,复.

基因克隆是70年代发展起来的一项具有革命性的研究技术,可概括为∶分、切、连、转、选.最终目的在于通过相应技术手段,将目的基因导入寄主细胞,在宿主细胞内目的基因被大量的复制.

贝勒大学医学院的研究人员利用一种特定的称为P[acman]的工具建立一库子的克隆,这个库涵盖了果蝇的绝大部分基因组,这个技术将为遗传学研究加速. 贝勒大学医学院的分子和人类遗传学教授Hugo Bellen和霍华德休斯医学研究所(Howard Hughes Medical Institute)的一位研究人员对这个新的克隆库进行了描述,他们的文章发表在当期《自然方法》(Nature Methods)杂志的在线版上. 科学家可以利用Bellen实验室Koen Venken博士建立的P[.

选择目的基因,并设计相应引物; 用引物PCR扩增目的基因片段; 选择合适(抗性标记、酶切位点等)的克隆载体(为了保真扩增),并将PCR片段连接入克隆载体中;(一般用Taq酶的PCR产物在末尾会自带一个A,可在Solution 1作用下与两端各带一个T的线性T载体直接相连) 将连接产物转化入感受态大肠杆菌,使之在含有抗生素的培养基上生长扩增; 从大肠杆菌中提取质粒(即前面的连接产物),酶切鉴定和测序鉴定均无误后将目的基因片.

前面的问题不是很清楚,至于大规模复制那个基因,可以通过PCR技术,可以在很短的时间内,复制得到2的几十次方个原来那个基因片段. 接下来,就是把目的基因转入,一般有原生质体介导法,即以原生质体为受体,借助于特定的化学或物理手段将外源基因(目的基因)直接导入植物细胞. 还有就是基因枪法,将外源基因包被在微小的金粒或钨粒表面,然后在高压的作用下将微粒高速射入受体细胞或组织. 根癌农杆菌介导法则是广泛侵染双子.

一般情况下有两种方法:一、反转录法:用已知的单链mRNA反转录出一条单链的DNA,再用碱基互补配对原则合成双链DNA.二、用已知的蛋白质的多肽链推测出单链mRNA(一个氨基酸对应相应的密码子)上碱基的排列顺序,再根据单链mRNA上碱基的排列顺序推测出一条单链DNA上碱基的排列顺序,再推测出双链DNA上碱基的组成,进行人工合成(用PCR仪).

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