qpcr模板浓度多少合适 qpcr rna浓度
我们一般不去特意检测提取的得到的模板浓度,纯度倒是要注意一下,紫外分光达到1.8即可,不过我们一般也不去检测.PCR的时候可以设置梯度,分别加0.5μl,1μl,1.5μl,2μl,2.5μl,3μl.不要低于0.5μl,也不要高于3μl.选择几个梯度做一下看看哪个效果好就用哪个.有时候为了省钱,就直接用1μl上去P,一般问题不大,出了问题再回头做梯度也不迟.总而言之,使得模板量在1μl左右最好.
模板DNA浓度主要看你的PCR扩增体系所使用的酶:1、一般普通的酶,DNA模板量在50到100ng都可以扩增出来的2、高效一点的酶,几ng也可以扩增出来的.1、PCR.
基因组做qpcr时,一般浓度为多少1.DNA 提取中会污染任何物质 蛋白 糖类 RNA等.其纯度一般用核算吸收OD260/OD280(蛋白质污染)分析判断,纯DNA比值为1.8.此外用OD280/OD230估计盐离子是不是太高. 5.分光光度分析DNA的A280/A260小于1.8;不纯,含有蛋白质等杂质.
PCR引物浓度一般选多少我使用的引物一般稀释到10μm. 20微升体系每个引物加0.4微升即可.你的50微升体系加1微升也不算多.你降低下退火温度试一试.
10uL体系PCR模板浓度该多少一般5~10um加1ul,相对来说少一点更好
模板的浓度对PCR有什么影响,一般要多大浓度?那要看你用的是什么模板了. pcr的灵敏度很高,几pg的DNA就能检测出来了.一般用pcr产物或者质粒做模板,只需要1ng左右就可以了,如果是基因组或者cDNA做模板,模板量可适当增加.
qpcr荧光值峰高一般多少比较好通常情况下,我们认定为15到35CT比较合理,超过35个CT那么就算它没有扩增了,如果15之前起峰,那么就是模板浓度太高所引起的 在荧光定量PCR技术中,有一个很重要的概念 —— Ct值.C代表Cycle,t代表threshold,Ct值的含义是:每个反应管内的荧光信号到达设定的域值时所经历的循环数
一般正常pcr产物的浓度是多少pcr产物浓度主要取决于模版的量和引物的量.如果模版属于稀有基因,那么产物浓度就不会高.而且你不要回收后才测浓度,pcr结束后就可以跑电泳或者测od值都很快的.另外,计算pcr的产物不要光看浓度,因为你回收后可以用100ulte去溶解产物,也可以用50.
荧光定量PCR模板浓度是否需要一致有内参基因做参照,所以不用的.但建议不同模版的浓度不要差太大
做实时定量的RNA的合适浓度是多少你说的实验应该是RT-qPCR,这个实验的主要目的就是检测RNA的含量的,所以一开始其实是很难给出一个具体的值的.通常建议根据所用的逆转录酶每个反应的RNA的量的大致需求,先完成逆转录反应,例如,下面就列出了某一种逆转录酶要求的模板范围.逆转录酶越好,这个范围就会越宽,主要是可以用的RNA量就可以更少.total RNA——1 pg - 5 μg poly(A) RNA —— 0.1 pg - 500 ng specific RNA —— 0.01 pg - 500 ng 等到将RNA都逆转录为cDNA后,再进行qPCR的实验.这时候可以将cDNA稀释几个梯度,以获得理想的Cq值.