哪些分子生物学的酶用于克隆和表达cDNA片段？常用克隆与表达载体

在分子生物学中常用为克隆表达载体的质粒有哪些，及其特点

用作克隆载体理想质粒般具备述特点：

　　①具松驰型复制（ColE1）复制（replicon）质粒自我增殖所必少基本条件并协助维持使每细胞含定数量质粒拷贝

　　②复制外存几单酶切位点（或克隆位点）便目DNA片段插入

　　③具插入失筛选标记理想质粒载体应具两种抗菌素抗性标志氨苄青霉素抗性基（Ampr）四环素抗性基（Tetr）等便平板直接筛选阳性重组

　　④量相较较高拷贝数外质粒缺点容量较般能接受于15kb外DNA插入片段导致重组扩增速度减慢甚至使插入片段失主要目基克隆建立DNA文库cDNA文库其复制即

限制性内切酶，DNA聚合酶，反转录酶，T4连接酶……很多啊，个人认为DNA聚合酶最常用

这个长度不算长了，一般的高保真酶像pfu，Kod什么的都可以。pfu可以用fermentas，kod是toyobo的，在中国有很多代理的。

一、根据载体的分子生物学特性划分

1. 质粒型载体—环状dsDNA分子，自主复制

2. 病毒型载体—环状、线状、ss-和ds-DNA分子，形成病毒颗粒

3.混合型载体—具质粒和病毒特性，特性的转换依赖于宿主细胞生物学特性

二、根据载体功能划分

1. 普通型载体

1) 特点: 至少有一个以上的克隆位点和两个标记基因，其中一个用于转化体选择，另一个用于重组子检测。

2) 用途: 基因组或cDNA文库的构建;次克隆(subcloning)或限制酶谱分析；外源DNA扩增。

例子: pBR322和pUC载体。

上述两例中的非重组子来源有两个：

a. 酶切反应时仍未被作用的pBR322或pUC18分子

b. 酶切后的载体分子经自我连接又形成载体分子