跑胶的电压越低越好 转膜时电压太低什么原因

你好!不超过220伏 打字不易,采纳哦!

在做western blot时,跑胶的电流越来越低可能原因有所加缓冲液不够新鲜,或者说是已经重复使用过很多次.内外槽缓冲液没有一定的落差,缓冲液的ph不够准确.如果是在恒压的状态下,因为凝胶里的导电介质逐渐减少,电流逐渐减少也是比较正常的情况.

在低电压时,线状DNA片段的迁移速率与所加电压成正比.但是随着电场强度的增加,不同分子量的DNA片段的迁移率将以不同的幅度增长,片段越大,因场强升高引起的迁移率升高幅度也越大,因此电压增加,琼脂糖凝胶的有效分离范围将缩小.要使大于2kb 的DNA 片段的分辨率达到最大,所加电压不得超过5v/cm.

1. 可能配胶有问题,建议重新查看一下配方. 2. 可能样没处理好.3. 电压问题,我们一般浓缩胶80V,分离胶120V.4. 可能染色液有问题.

看图中短板上的泡沫,应该没漏.这种哭脸形状,可能是电压过高,散热不及时造成的.如果电泳缓冲液用了很长时间,粘稠、起泡,也会使电流变小.

要跑好电泳图,注意这些方面:1、凝胶一定要加热熔解完全,均匀,可以对着光亮的地方看看是否清澈;2、一般情况下,梳子越薄而长,条带越好看;3、上样量不宜过多,会造成条带的相互挤压;4、如果点样孔多余,尽量将样点到中间,尽量避免边缘效应,如果电泳槽够大,将胶放在中间一些,电场比较均匀;5、电泳电压一般在7-10V/CM之间;6、做胶的缓冲液和跑胶的缓冲液浓度应该一致;7、胶的浓度可能也会有一点点影响,一般用1.5%或者1.7%.8、加样时不要太快,让其自然沉底,均匀分布在电泳孔内.9、电泳开始时可以采用低电压使其跑出孔后,再调高电压.

浓缩胶的目的使得loading的样品能够在同一条水平线上进入分离胶,如果电压太大前端的蛋白容易在后面的蛋白赶上来前进入分离胶.而在分离是理论上(实际上也是)小电压长时间分离的效果会更好,但是在操作过程中没有必要等那么长的时间,所以就用大电压快点跑.

1,如果你的DNA分子量很大,用TBE跑就慢,可用TAE. 2,胶的浓度太高,提取的DNA用0.6%-0.8%的胶,PCR结果用1.0%-1.2%的. 另外说一下:你的电压是否太高,就算120V跑得快,那跑出来,条带是否会比较粗糙,其形状给人以嚣张的感觉?一般应该根据电泳槽长度算出电压,电压应是5-10V/CM左右.我用的电压是80V,电泳槽长度大概25公分左右,电压低一些,时间长一些,但条带含蓄内敛,姿态优美,赏心悦目,风魔万千老师.

在电泳的过程中,电压和电流的大小与板的长度,缓冲液的pH,离子强度等很多因素都有关系,而且二者之间又有互相制约的关系.一般的电泳仪,可调的都是最大电压.

4-5个小时应该没问题,但常温下不要放的时间太长,那样胶会干,配好后让胶浸没在1X电泳液中,放4度冰箱,一个礼拜绝对没问题.浓缩胶80V,分离胶一般120V,但是分离胶可以根据自己的需要调整.