限制酶切割位点怎么判断 限制酶切割位点讲解

基因工程中的构建基因表达载体需用到限制酶和DNA连接酶,限制酶会识别限制酶切割位点(即某个DNA序列,如AACC--TTGG,当然,不同的限制酶作用位点不一),限制酶能将磷酸二酯键切断,不是随便切断,而是特定的.

1、位置:一条单链DNA上可能有多个识别位点,但一个识别位点只有一个酶切位点.2、对称性:限制酶的识别位点大多数为回文对称结构,切割位点在 DNA 两条链一定.

酶切位点是在引物上加入的.注意添加酶切位点的时候要在引物5'端加入,3'端要保证至少12个碱基的完全配对区域.

限制酶MunI和限制酶EcoRI的识别序列及切割位点分别是-C↓,AATrG-和-G↓,AATrC-.基因工程的概念:基因工程的别名:基因拼接技术或DNA重组技术 操作环境:生物体外 操作对象:基因 操作水平:DNA分子水平 基本过程:剪切→拼接→导入→表达 结果:人类需要的基因产物

酶切位点的距离太小(小于10bp),影响限制性内切酶对切点的识别,不利于空载体的双酶切(会切不开哟!) (1)一般目的基因用于克隆表达的情况下,酶切位点的选择要考虑到:目的基因片段内部不含有所选的酶切位点(不然鉴定阳性重组子双酶切时会将目的基因切断) (2)实验后继应用的所有载体(真核、原核、酵母、昆虫)都尽可能含有所选的酶切位点.并且要保证在载体上的插入方向正确(定向克隆).(不然换载体表达时,还要重新设计引物,以引进新的酶切位点) (3)尽可能选比较常用的酶切位点.(常用切点酶的价格比较便宜)

识别位点是说酶识别的碱基对序列,比如其中一条链ATCGAT,酶识别到了之后,对TC之间的连接键进行打断.

看样子你是要做克隆,给你说说我的经验吧,带酶切位点的引物设计:保护碱基(4个)+酶切位点(6或8个)+与模板匹配序列(15-20个).如果是一般的质粒做模板15个配对的绝对没问题,如果是比较复杂的模板,文库一类的,20-25个.保证3'端的5个碱基里有3个是g/c就行.我从来不用软件分析的.pcr时,退火温度就是60度,25个循环.你试试吧,肯定没问题的,我以前设计引物时也是很小心的,用软件分析半天,其实发现没有多大影响的.发卡结构,3'封闭,gc含量,tm值,影响也都不是这么大.纯属经验,希望你的实验有好结果吧

限制性内切酶是一抄种可以特异性识别特定的DNA位点并对该DNA分子进行切割的一种酶.它识别袭的位点一般为回文序2113列,有这个位点就会切,但不一定是在特异性位点附近切5261割(可能会将具有这个位点的DNA随意切割,也可4102能只在位点附近或1653位点处切割,要看这种内切酶的类型).

首先要知道基因序列,然后很多软件(譬如DNAMAN)都可以分析其中酶切位点

怎样判断酶切位点是粘性末端还是平末端 用限制酶切割后得到的末端齐平就是平末端,一长一短就是粘性末端 根据限制性内切酶切割dna所产生的产物末端,发现限制性内切酶对dna的切割有两种方式,即平切和交错切.所谓平切,就是限制性内切酶在dna双链的相同位置切割dna分子,这样产生的末端就是平末端.交错切就是限制性内切酶在dna双链的不同位置切割dna,产生的dna片段的末端不是平齐的