细胞破碎离心后的蛋白质分布在哪里？ 原核细胞能合成蛋白质吗

• 细胞破碎液离心之后目的蛋白条带更明显吗
• 血液离心分离后，纤维蛋白在上层还是在下层？血清如果呈凝胶状，象果冻一样不易流动是什么原因？
• 在噬菌体侵染大肠杆菌的实验中，为什么离心后蛋白质位于上清液而DNA位于下清液？具体解释一下，谢谢
• 细胞破碎后蛋白还会残留在包涵体么

细胞破碎液离心之后目的蛋白条带更明显吗

细胞破碎液离心之后目的蛋白条带更明显

细胞破碎后，用缓冲液提取蛋白质，用什么方法能得到蛋

蛋白质分离纯化的一般程序可分为以下几个步骤：

（一）材料的预处理及细胞破碎

分离提纯某一种蛋白质时，首先要把蛋白质从组织或细胞中释放出来并保持原来的天然状态，不丧失活性。所以要采用适当的方法将组织和细胞破碎。常用的破碎组织细胞的方法有：

1. 机械破碎法

这种方法是利用机械力的剪切作用，使细胞破碎。常用设备有，高速组织捣碎机、匀浆器、研钵等。

2. 渗透破碎法

这种方法是在低渗条件使细胞溶胀而破碎。

3. 反复冻融法

生物组织经冻结后，细胞内液结冰膨胀而使细胞胀破。这种方法简单方便，但要注意那些对温度变化敏感的蛋白质不宜采用此法。

4. 超声波法

使用超声波震荡器使细胞膜上所受张力不均而使细胞破碎。

5. 酶法

如用溶菌酶破坏微生物细胞等。

(二) 蛋白质的抽提

通常选择适当的缓冲液溶剂把蛋白质提取出来。抽提所用缓冲液的pH、离子强度、组成成分等条件的选择应根据欲制备的蛋白质的性质而定。如膜蛋白的抽提，抽提缓冲液中一般要加入表面活性剂（十二烷基磺酸钠、tritonX-100等），使膜结构破坏，利于蛋白质与膜分离。在抽提过程中，应注意温度，避免剧烈搅拌等，以防止蛋白质的变性。

（三）蛋白质粗制品的获得

选用适当的方法将所要的蛋白质与其它杂蛋白分离开来。比较方便的有效方法是根据蛋白质溶解度的差异进行的分离。常用的有下列几种方法：

1. 等电点沉淀法

不同蛋白质的等电点不同，可用等电点沉淀法使它们相互分离。

2. 盐析法

不同蛋白质盐析所需要的盐饱和度不同，所以可通过调节盐浓度将目的蛋白沉淀析出。被盐析沉淀下来的蛋白质仍保持其天然性质，并能再度溶解而不变性。

3. 有机溶剂沉淀法

中性有机溶剂如乙醇、丙酮，它们的介电常数比水低。能使大多数球状蛋白质在水溶液中的溶解度降低，进而从溶液中沉淀出来，因此可用来沉淀蛋白质。此外，有机溶剂会破坏蛋白质表面的水化层，促使蛋白质分子变得不稳定而析出。由于有机溶剂会使蛋白质变性，使用该法时，要注意在低温下操作，选择合适的有机溶剂浓度。

（四）样品的进一步分离纯化

用等电点沉淀法、盐析法所得到的蛋白质一般含有其他蛋白质杂质，须进一步分离提纯才能得到有一定纯度的样品。常用的纯化方法有：凝胶过滤层析、离子交换纤维素层析、亲和层析等等。有时还需要这几种方法联合使用才能得到较高纯度的蛋白质样品。

血液离心分离后，纤维蛋白在上层还是在下层？血清如果呈凝胶状，象果冻一样不易流动是什么原因？

下层，至于不易流动的话，有可能离心的时候没有离心好，还有一种可能，在抽血的时候直接把血从针筒用力压入生化管内也会造成血清凝胶状，不易流动。

在噬菌体侵染大肠杆菌的实验中，为什么离心后蛋白质位于上清液而DNA位于下清液？具体解释一下，谢谢

噬菌体侵染大肠杆菌实验主要是为了证明遗传物质是DNA而不是蛋白质，这是一。

噬菌体由蛋白质外壳和DNA组成，这是二。

噬菌体侵染大肠杆菌之后，同位素标记过的噬菌体DNA被注入大肠杆菌细胞，离心之后这些标记的DNA随着大肠杆菌细胞沉降在试管底部，而噬菌体的蛋白质外壳则留在细胞之外，由于蛋白质分子相对于细胞来说小很多，不容易离心，所以留在上清，这是三。

细胞破碎后蛋白还会残留在包涵体么

涵体即表达外源基因的宿主细胞，可以是原核细胞，如大肠杆菌；也可以是真核细胞，如酵母细胞，在光学显微镜下可见、哺乳动物细胞等。多为圆形、卵圆形或不定形。一般是由完整的病毒颗粒或尚未装配的病毒亚基聚集而成；少数则是宿主细胞对病毒感染的反应产物。包涵体是病毒在增殖的过程中，常使寄主细胞内形成一种蛋白质性质的病变结构