如何利用pGL3-basic质粒验证一段DNA序列是否具有启动子活性？

如何鉴定某一dna片段是否为启动子

启动子是一段位于结构基因5'端上游区的DNA序列,能活化RNA聚合酶,使之与模板DNA准确地相结合并具有转录起始的特异性.因为基因的特异性转录取决于酶与启动子.

如何验证跟启动子的结合?

双荧光检测~1、将基因的启动子区域克隆至pgl系列质粒上2、将“某蛋白”的cdna克隆至真核表达质粒上(如pcdna系列)3、将1和2中的两个质粒共转染至真核细胞中,并设置空白组,培养4、使用双荧光检测试剂盒(dla,比如promega公司就有),配合化学发光仪读数,即可以判断蛋白通过与启动子结合调控下游基因~祝你顺利~

pgl3质粒sv40启动子什么作用

利用双荧光素酶报告系统探讨活化T细胞核因子(NFAT)能否调控常见组成性启动子CMV,SV40和TK,为不同条件下选择合适双荧光报告系统内参提供依据.方法:用限.

如何通过一个基因组序列获得启动子

如何通过一个基因组序列获得启动子 定义:启动子是参与特定基因转录及其调控的DNA序列.包含核心启动子区域和调控区域.核心启动子区域产生基础水平的转录,调控区域能够对不同的环境条件作出应答,对基因的表达水平做出相应的调节. 区域:启动子的范围非常大,可以包含转录起始位点上游2000bp,有些特定基因的转录区内部也存在着转录因子的结合位点,因此也属于启动子范围.

在基因表达载体的构建步骤中,原质粒是否含有启动子和终止子?

单单从“原质粒是否含有启动子和终止子”这个问题本身来讲,答案是肯定的.可以用来做基因工程载体的质粒,一个最重要的前提就是,它能自主复制.自主复制,作为.

如何查找一个基因的启动子序列

“search ensembl“标题下search后的下拉框中选中物种名homo sapiens(人),for. 中输入数值确定启动子长度(默认为600),比如1000,点击update; (5)出现的序列.

如何证明某个基因受转录因子的直接调控,简述实验设计

1.双荧光报告实验!!!!2.敲低转录因子基因,靶基因表达下调!3.设计转录因子结合区突变体,gel-shifting实验!!!

求助pGL3 - basic质粒Sanger测序引物选择

先连接T载体是为了提高转化效率一般来说市面上出售的T载体都进行了优化,容易连接片段(也就是效率较高),因此构建表达载体时有时会先连接T载体.同时T载体的测序引物比较明确(商业化的缘故),因此测序也方便一些.更重要的是,T载体往往设计了蓝白斑筛选的功能,插入片段的载体会呈现白色,这样也容易区分验证,不用每个单菌落都拿去做colony PCR或提质粒酶切验证.当然也不是绝对的,我们实验室就经常直接把片段酶切后连接表达载体,不经过T载体这一步,其实影响并不大.如果你的情况比较特殊(比如片段较大,或是对应的表达载体拷贝数较低等),可以考虑连接T载体,不然的话不是非常必要.

【求助/交流】如何通过一个基因组序列获得启动子?

有全基因组测序结果或者有大片段的测序结果的,基因组序列往上游找有基因组文库的话筛库只有结构基因信息的话做反向PCR或者TAIL-PCR

在载体上怎么找启动子序列

一般的商业公司提供的载体,都会标明的.可以用软件分析.比如这个http://www.cbs.dtu.dk/services/Promoter/可以根据序列来推测哪里是启动子