如何用双酶切鉴定外源DNA在重组质粒中的插入方向,说说其原理并用图表示？

如何用双酶切鉴定外源DNA在重组质粒中的插入方向,说说其原理并用图表示?

在基因插入的邻近末端部位选择一个单酶切点( B ),在载体上选一个单酶切点( A ),用这两个内切酶分别酶切两份重组质粒,正、反两个方向的插入将产生不同大小的 DNA 片段,通过凝胶电泳即可鉴定插入片段方向是否正确.

怎样用限制性内切酶鉴别基因的插入方向?

吼吼~~方法还是挺多 要看具体情况了比如可以基因内靠近某一段找一个切点 再在载体上找一切点 双切就可以了不同的方向会切出不同的结果

在重组的质粒中,如何让确定基因插入的方向是否正确

因为两头的酶切的位点是用的不一样的~~~ 当然,转完了还是要测序的~~~从而确定~~~

重组质粒如何鉴定

是区分重组质粒与普通质粒吗?如果是,最2113简单的方法就是用探针进行DNA分子5261杂交 另外还有种方法,当普通质粒上有两个或以上的标记基因,而目的基因的拼接处正好破坏4102一个标记基因就可以 如:普通质粒,抗青霉素也抗四环素,但目的基因正1653好插入时破坏了抗四环素基因,那么,双抗的就是专导入普通质粒,只抗青霉素而不抗四环属素的导入的就是重组质粒,都不抗的没有导入质粒.

重组质粒双酶切鉴定

既然你的质粒已经提出来了,那么感受态、转化等因素就不必再考虑了.你看看双酶切后载体的位置有几条带,如果是两条,那说明酶切不完全,如果是一条,那说明酶切效率没问题.pET28a分子量为5.6k,你的插入片段为500bp,如果你的质粒完全切开,载体和插入片段的摩尔比为1:1,质量比就是5.6k:0.5k,跑胶后两条带的亮度比就是10:1,所以你目的条带很淡非常正常.换句话说,你的实验一切正常,那条500bp的条带可能本来就应该那么淡.

如何鉴定单酶切目的片段连接的方向

常用的方法:1)酶切,选择酶有一定的技巧,用插入片段自身的一个酶切位点(当然不要选择正中间的,尽量偏一点,比如片段是1Kb,选择200bp处的或800bp处的)和载体插入片段一侧的酶切位点,通过检测切出来的片段大小来确定插入方向.2)PCR,用你目的片段的引物配上载体上的引物,目的片段正向引物与载体反向引物配对,能P出来即正向插入,目的片段正向引物与载体正向引物能P出来则是反向插入.仔细想想,这两个是最简单最方便的方法了.

有没有人能帮我解释一下DNA连接质粒时,什么是正向插入什么事方向插入,最好能用图说明一下,谢谢!

质粒在你插入的片段上游是有启动子区域的,在插入的时候有时由于是单酶切或者TA克隆或者平末端克隆,你是无法确定基因插入的方向的.如果你插入序列的ATG起始密码子是跟在启动子后面,你就是正向插入,如果你插入序列的终止密码子是在启动子后面,那你就是反向插入了,这时候你插入的序列是不能够正常表达的

构建重组质粒时,插入目的基因用的限制酶应该是什么.图中bcl1与hind3切割完后不互补为什么能.

载体上很多酶切位点就是供你选择的,你说的是双酶切方法,载体和目的基因用相同的两种酶进行双酶切,这样就能保证目的基因连入载体时不会出现方向错误,单酶切由于两端末端一样,所以在连入的时候没有方向感,这在表达时,连入相反方向的基因就可能不表达或者表达的不是你要的基因,因为两端颠倒了,不知道我说明白没有

为什么要对重组质粒DNA进行双酶切

双酶切就是为了验证是否有目的基因,如果双酶切条带正确,而且PCR也没有问题,就可以确定质粒构建成功.质粒具有稳定可靠和操作简便的优点.如果要克隆较小的...

请问怎样从凝胶电泳判断DNA插入片段的方向,谢谢!

这个可以通过载体和插入序列(必须已知)上的酶切位点见的距离来判断.用不同的酶组合和消化,跑胶后得到不同的长度组合,可以推出.基本原理就是排列组合